合同管理概念范文
前言：我们精心挑选了数篇优质合同管理概念文章，供您阅读参考。期待这些文章能为您带来启发，助您在写作的道路上更上一层楼。
第1篇
夜上海论坛 【关键词】历史教学；问题意识；培养兴趣
新世纪面对着新课程改革，作为历史教学者应该怎样去做呢？这是每一位一线历史教师多年来一直思考的问题。目前的教学工作总是提到，要紧扣课程标准，围绕教学大纲，开展教育教学工作，同时还要体现新课程的理念，这就无形中给教师教学工作增加了巨大的压力。一堂课究竟怎样上才能最大限度的发挥教师的辅导性和学生的主动性，体现以学生为主体的优势，利用45分钟最大限度地激发和调动学生的积极性和潜能，让其每个学生都参与到教学中去，同时又能在以后应试教育和素质教育相结合的教育中取得良好的成绩，又能在教育教学中培养高尚的情操和爱国主义教育，树立远大理想，为实现伟大复兴中国梦做贡献。这就需要教师研究中学历史教学问题意识，培养学生历史问题意识，然后指导、解决。
夜上海论坛 目前，中学历史教学观念的滞后性、中学生缺乏历史学习中的问题意识，与当前社会、学校等历史教学观念的滞后性有着密切的联系。教师选定每一课每一个问题、指导学生去解决而不是让学生提问题，然后想办法去解决问题，这是传统课题的教学方法和方式。因此，在当前新课改以素质教育不断深化的过程中，历史教学的问题意识要改变、要转变，历史教学的本质、目的、过程等都应当有所改进和提高。
另外，中学历史教学的手段贫乏和单一，历史教学大多是以课本为主，并且以平面化的文字、图片为主，过分理论和政治化、缺乏时尚感和生活化，从而也弱化了学生的学习兴趣。这就要每一位中学历史教师的努力和研究，创造性地进入教学。
夜上海论坛 一、培养中学生“问题意识”启发学生的积极性
在教学实践中，中学历史的课堂教学方法是多种多样的，其功能和作用也各不相同。在当今新课程课堂教学的过程中，中学历史教师应当结合学生的年龄特征和认知能力，选择和运用适当的教学内容和素材及历史故事和要件，更新教学观念，采用不同方法和途径，构建问题平台，搭建教学舞台，让学生参与，注重学生的能力，培养学生的质疑能力，使其提出问题、研究问题、从而解决问题。
夜上海论坛 二、培养中学生对历史课程的兴趣，激发创造性学习的能力
爱因斯坦曾经说过，“兴趣是最好的老师”。强烈的好奇、浓厚的兴趣，是学生们产生提出问题的前提。教师应动用一切教学手段和方法，努力培养学生的兴趣，激发他们提出问题、探究问题并解决问题。例如：教师可以通过向学生展示历史歌曲、播放历史影像材料、展示历史图片、利用家乡历史素材（乡土教材），让学生出演历史短剧等形式，让学生自己去琢磨历史、触摸历史、理解历史、感知历史、走进历史、学习历史，对历史产生强烈的好奇和丰富的想象力，并将好奇心转化为持久的精神动力。
三、改变传统教学方式和观念，鼓励学生提出问题，一切创造始于“问题”
在初中历史教学的过程中，教师要进行继续学习和教育，增加知识，更新知识，研究问题、整合知识，绝不能在知识层面上止步不前，二是应当大胆地改变传统的历史教学理念和方式，鼓励学生们提出问题、树立问题意识的理念，并让课堂教学成为提出问题、探究问题、解决问题的思维实验室。
四、加强历史教研和教研组内文化建设
教研和教研组的建设和存在的目的在于教学研究，教学质量的提升、教学问题的解决、教学经验交流交换和积累，团结和谐的教学教研氛围是舒适的工作环境和高水平的教育教学的保证。成员之间相互信任、注重交流、研究和探讨、尊重和支持，可以优势互补、群策群力、共同进步，完成教学，以便更多的解决学生可能发现提出的问题。
第2篇
夜上海论坛 关键词：政府管理创新，生态系统，意义，概念，特征
一、政府管理创新生态系统的提出
夜上海论坛 政府管理创新生态系统作为学术范畴而被严格界定和科学论述，严格地说是从经济体制转轨和社会结构转型背景下人们对政府管理活动进行新途径、新方式、新模式和新机制的探索开始的。在学术界，诸多专家和学者对政府管理创新问题有着研究兴趣，并撰写出相应的理论成果，对于指导政府管理创新实践具有指导意义和价值，但多数研究仅仅局限于政府管理实践活动层面上，没有突破政府管理学的理论境遇和思维逻辑，难以摆脱传统政府管理创新理论的羁绊与禁锢，认为政府管理创新就是管理理念的革新、管理方法的改进和管理内容的变更和管理手段的变换,将政府管理创新视为外在于管理环境而独立存在的实践活动。
夜上海论坛 近年来，一些学者将政府管理创新研究的主题转向了理论分析的方法论层面。生态学强调生物与环境之间的协同共生和持续演化，其所内涵的动态、多样、平衡和有序的思想使得其逐渐成为分析社会现象和问题的有效工具。如果将政府管理创新置于生态学的理论视野内加以审视，可以发现：政府管理创新是一个复杂的有机整体，其与所依存的外部环境之间存在着相互作用、相互影响、相互促进的协同关系和共生关系；不论在构成要素方面，还是在要素之间关系方面，乃至要素与外部环境之间关系方面，政府管理创新都处于一个构成要素多样、环境因素复杂的生态系统中，可以将这个系统理解为“政府管理创新生态系统”。
作为社会生态系统的典型形态，政府管理创新生态系统的正常运作必须具备三方面的条件：第一，必须由人和人围绕的政府管理创新要素、条件、活动组成。人和政府管理创新要素、条件、活动既是政府管理创新生态系统的最基本构成要素，也是政府管理创新生态系统得以存在的基础和实际载体。第二，基本构成要素之间、要素与环境之间、环境与环境之间存在相互作用和相互联系的机制。第三，具有特定的功能，这是整体具有不同于各个组成要素的新功能，这种新功能是由系统内部的有机联系和结构决定的，而单个构成要素则不具备，一旦特定功能被取代，系统就会面临升级转型或者解体消亡。只有同时具备这三个条件，政府管理创新生态系统才是所谓的生态性政府管理创新生态系统，任何条件的不具备或者不完全具备，都会影响到政府管理创新生态系统的生态活度。
二、政府管理创新生态系统的意义
首先，有利于培养政府管理创新的生态认知。认知是行动的先导，认知水平的高低直接决定行动过程及结果的绩效水平。目前，一些地区政府在进行管理创新时，既不充分了解自身的管理实践情况，也不全面顾及政府管理创新的内外环境，进而造成政府管理创新过程的不通畅和创新绩效的不明显，严重影响了政府管理创新活动的顺利开展。通过营造政府管理创新生态系统，梳理政府管理创新要素的内在关系，规整政府管理创新的各种环境条件，实现要素关系和环境条件的动态平衡与协调统一，有利于培养政府管理创新主体的生态认知，使其在政府管理创新过程中既注重要素、环境条件的客观性，也强调要素关系和环境条件利用的差异性和整体性。
其次，有利于提高政府管理创新的生态价值。生态文明的不断崛起和生态意识的渐入人心，使得生态理念逐渐成为指导人们社会实践活动的主要理念，人们在评价实践活动价值时，不仅考虑实践活动的社会价值和经济价值，也越来越考虑到实践活动的生态价值。对于政府管理创新而言，生态价值也是其追求的价值目标之一。每个政府管理创新活动都可以视为一个生态系统，构成这一生态系统的基本要素，例如创新主体、创新对象、创新内容、创新手段、创新机制等，由于它们在生态系统中的角色和地位有所差异，因而这些构成要素的生态位也各不相同。论文参考，意义。每个要素生态位的错位都会直接影响到系统内部要素关系的稳定，进而影响到政府管理创新生态系统的有序发展。这也正是目前部分政府管理创新绩效不明显的原因所在。论文参考，意义。通过营造生态系统，来实现政府管理创新要素功能和要素关系的最优化，进而提高政府管理创新的生态价值。
夜上海论坛 最后，有利于增强政府管理创新的竞争优势。对于政府管理创新主体而言，对自身情况和内外环境条件的准确认知是其合理利用内外环境因子，充分发挥管理创新竞争优势，实现持续稳定发展的重要基础。同时，也要有效调节系统内部各要素之间的生态关系，使它们能够最大限度地发挥各自的功能作用。要素和要素之间关系的重叠竞争，要素和环境之间关系的无序紊乱，都会造成政府管理创新要素之间的功能妨害与效能内耗，进而影响到政府管理创新竞争优势的提高。为此，在内部层面就需要保持政府管理创新要素之间关系的有序稳定，在外部层面就需要保持政府管理创新要素与外部环境之间正常的物质循环、能量流动和信息传递。内外层面的有机结合形成平衡有序的生态系统，使得政府管理创新过程得以持续开展，竞争优势得以有效提高。
夜上海论坛 三、政府管理创新生态系统的特征
在持续不断的运作过程中，政府管理创新生态系统逐渐形成了协同共生的内外环境关系，体现出整体性、层次性、复杂性、动态性和自校性等基本特征。
1.整体性。与自然生态系统相类似，政府管理创新生态系统也具有一定的空间形态。它是政府管理创新生态系统在不断适应内外环境变化过程中形成的，是政府管理创新生态系统与内外部环境相互适应、相互作用的结果体现。空间形态既可以表现政府管理创新生态系统的空间结构，也可以反映政府管理管理生态系统的未来发展取向；既可以为政府管理创新目标的确定、创新方向的把握和创新战略的制定提供客观依据，也可以为相关
夜上海论坛 主体了解政府管理创新的本质和规律提供重要参考。论文参考，意义。政府管理管理生态系统的空间形态主要由社会空间、经济空间和自然空间组成，社会空间是政府管理创新生态系统存在和发展的重要条件，主要包括政治空间、教育空间、文化空间、科技空间和制度空间等；经济空间是政府管理创新生态系统存在和发展的基础条件，也是政府管理创新生态系统价值目标的主要指向；自然空间是政府管理创新生态系统存在和发展的根本条件，也是政府管理创新生态系统需要深入研究和分析的空间范围。自然空间对政府管理创新生态系统的影响具有直接性和客观性。三个空间之间相互影响，相互作用，形成有机统一的空间形态，共同制约政府管理创新生态系统的生存发展。论文参考，意义。
夜上海论坛 2.层次性。结构是要素之间关系的结合形式和联系状态。系统结构是系统内部构成要素之间的关系状态以及各要素之间的比例特点。政府管理创新生态系统的结构就是组成政府管理创新生态系统的各要素之间的联系形式以及各要素与外部环境之间的关系形式。论文参考，意义。由于政府管理创新生态系统既是社会生态系统的子系统，也是一个具有相对独立功能和发展演化规律的有机系统，因此，政府管理创新生态系统的结构既表现社会生态系统的部分性质，也表现有别于其他生态系统的特征。从规模大小上，政府管理创新生态系统结构可分为宏观结构、中观结构和微观结构。宏观结构主要以社会环境结构为背景，中观结构主要以区域社会环境结构为背景，微观结构主要以某个政府的具体管理环境为背景。从时空维度上，政府管理创新生态系统可分为纵向结构和横向结构，纵向结构主要是各级政府行政级别的大小不同形成的结构，横向结构主要是同一级别政府部门形成的结构。宏观中观微观结构相互渗透、纵向横向结构彼此交融，共同形成动静结合、纵横交错的政府管理创新生态系统的网络结构。
3.复杂性。政府管理创新生态系统是由生态主体和生态环境组成的有机系统。政府官员、政府工作人员和政府管理创新研究人员等构成政府管理创新生态系统的生态主体；对生态主体产生作用和影响的各种生态因子的结合构成政府管理创新生态系统的生态环境，主要包括社会生态环境、经济生态环境、自然生态环境等，各层面环境都不同程度地对政府管理创新生态系统运作产生影响。不同的生态主体拥有不同的生态环境，同一生态主体在不同的发展时期也需要不同的生态环境。通过生态主体之间及其与生态环境之间的相互作用，政府管理创新生态系统形成了适应环境的能力、影响环境的能力，并不断实现从低级到高级、从简单到复杂、从无序到有序的发展演化。随着经济体制转轨和社会结构转型，经济发展的快速化、社会竞争的激烈化、人际关系的复杂化和利益主体的多元化日渐明显，分配差距的拉大、腐败现象的蔓延、阶层分化的多元等社会问题也开始出现[1]，使得政府管理创新生态系统的生态环境更加复杂，给政府管理创新生态系统的运作发展带来了一定挑战。
夜上海论坛 4.动态性。在生态学的理论视域中，生态因子是指对生物的生长发育具有直接或间接影响的外界环境要素。论文参考，意义。生态因子与生物之间的相互作用相当复杂，各种生态因子的有机结合形成生态环境，每个生态因子都具有不可替代性或可调剂性。同样，组成政府管理创新生态系统的生态环境的因子都是生态因子，各种生态因子对政府管理创新生态系统的发展起着推动或者制约作用。按照表现形式，政府管理创新生态系统的生态因子可分为社会生态因子、经济生态因子和自然生态因子，社会生态因子包括文化因子、教育因子、社会制度与政策因子、国际政治因子和科学技术因子；经济生态因子包括消费市场因子、物资市场因子、资金市场因子、劳动力市场因子、产业与产业结构因子、交通因子、通讯因子、国际经济因子；自然生态因子包括地域地缘因子和自然资源因子。[2]各种生态因子相互促进、相互联系、相互制约，任何生态因子的变化，必然会引起其他生态因子的变化，进而影响政府管理创新生态系统的发展。
5.自校性。与自然生态系统不同，政府管理创新生态系统的自校平衡性更具有主动性，这是由于政府管理创新生态系统的主体——人具有更强的意识性和能动性。政府管理创新生态系统并不是完全受制于外部环境，它会根据自身的实际情况和环境发展变化的具体要求，来不断适应环境变化。从过程机制上看，自校平衡主要是由政府管理创新生态系统与外部环境之间的物质循环、能量流动和信息传递的不平衡所致。物能流转的不平衡往往会带来政府管理创新生态系统内部结构、功能的不稳定，影响政府管理创新生态系统的正常运转。为了保持系统内外环境关系的平衡有序，政府管理创新主体就需要采取相关措施加以解决。这些措施大致可以分为两个方面：一是政府管理创新主体通过优化关系结构、调整功能机理和整合运作机制来保持与外部环境之间关系的平衡有序；二是通过适当改变环境因子、规整环境条件和调试环境空间来实现与外部环境之间关系的协调统一。
参考文献：
夜上海论坛 [1]李景春.研究生党建创新的SWOT分析[J].学位与研究生教育.2006,(8):46-50
[2]梁嘉华等.企业生态与企业发展:企业竞争对策.北京:科学出版社.2005:22-25
第3篇
夜上海论坛 【关键词】 杯状细胞
夜上海论坛 【Abstract】 AIM: To investigate the effects of human calciumactivated chloride channel 1 (hCLCA1) on synthesis of mucin in airway goblet cells. METHODS: Recombined eukaryotic expression plasmid pIRES2EFGP/hCLCA1， which contained fluorescence tag and G418 screening flag was constructed. The plasmid was stably transfected into NCIH292 cell line， which was regarded as goblet cell model in vitro. Transfected NCIH292/hCLCA1 cells were identified by fluorescence microscopy and hCLCA1 mRNA was detected by RTPCR. Cells were pided into four groups with or without hCLCA1 inhibitor NFA: ① NCIH292; ② NCIH292/hCLCA1; ③ NCIH292+NFA; ④ NCIH292/hCLCA1+NFA. The proliferation of the cells in all groups was detected using MTT colorimetry. The expression of mucin MUC5AC protein and mRNA was examined with PAS staining and RTPCR assay， respectively. RESULTS: NCIH292/hCLCA1 cells that stably expressed hCLCA1 were obtained. The proliferation capability， mucin protein expression and mRNA level of NCIH292/hCLCA1 cells were all significantly higher than those of untransfected cells. NFA markedly inhibited the above changes of NCIH292/hCLCA1 cells. CONCLUSION: hCLCA1 promotes the proliferation and mucin synthesis in airway goblet cells. This study indicates that the inhibition of hCLCA1 may be a potential treatment for asthma.
【Keywords】 asthma; airway; epithelial cells; goblet cells; chloride channel
夜上海论坛 【摘要】 目的： 探讨人激活Cl通道I型（hCLCA1）在气道杯状细胞合成黏蛋白中的调控作用. 方法： 以人气道黏液上皮细胞系NCIH292作为杯状细胞特性研究的体外模型，构建携带荧光蛋白标签的真核表达质粒pIRES2EFGP/hCLCA1，转染NCIH292细胞，用G418筛选稳定表达hCLCA1的细胞NCIH292/hCLCA1. 对被转染细胞采用荧光显微镜和RTPCR法检测hCLCA1 mRNA. 根据NFA（hCLCA1阻断剂）干预与否，将细胞分为4组： ① NCIH292；② NCIH292/hCLCA1；③ NCIH292+NFA；④ NCIH292/hCLCA1+NFA. MTT法检测各组细胞的增殖活性；PAS特染法检测各组细胞黏液糖蛋白的表达状况， RTPCR法检测黏蛋白MUC5AC mRNA水平. 结果： 经过500g/L的G418筛选，证实获得NCIH292/hCLCA1细胞. 对各组细胞检测结果表明，NCIH292/hCLCA1细胞的增殖活性、黏液糖蛋白表达量及MUC5AC mRNA水平均显著高于亲本细胞，并且NFA能有效抑制NCIH292/hCLCA1的这些生物活性改变. 结论： hCLCA1能有效促进气道杯状细胞的增殖能力及黏蛋白合成，早期阻断hCLCA1可能是哮喘防治的有效途径之一.
【关键词】 哮喘；气道；上皮细胞；杯状细胞；氯化物通道
0引言
夜上海论坛 气道上皮杯状细胞增生及伴随的黏蛋白高分泌是哮喘的主要病理特点之一，并已成为病情加重的指征［1］. 杯状细胞产生的黏蛋白MUC5AC被认为是该细胞增生的标志［2］. NCIH292是一种人气道黏液上皮细胞系，能产生多种黏蛋白，常被作为杯状细胞功能特点研究的体外模型［3］. Hoshino等［4］和Toda等［5］相继证实，哮喘患者气道杯状细胞的人钙激活Cl通道I型（human calciumactivated chloride channel， hCLCA1）高表达. hCLCA1属于一种新近发现的跨膜阴离子通道家族，一般认为该家族与胞膜转运水和电解质的功能相关. 我们拟利用体外培养NCIH292细胞，探讨hCLCA1与黏蛋白合成的关系.
1材料和方法
1.1材料
人气道黏液上皮细胞系NCIH292(西京医院呼吸内科实验室保存)；pcDNA3.1(+)/hCLCA1质粒(美国Levitt RC教授惠赠)；CLCA阻断剂NFA（niflumic acid）(Sigma公司)；大肠杆菌JM109及真核表达载体pIRES2EGFP（具有双顺反子）（第四军医大学生物化学与分子生物学教研室）；γTaq DNA多聚酶、T4 DNA连接酶及限制性内切酶NheⅠ， XholⅠ （TaKaRa公司）；RevertAidTM逆转录试剂盒（Fermentas公司）.
1.2方法
夜上海论坛 1.2.1pIRES2EGFP/hCLCA1表达质粒的构建采用NheⅠ和XholⅠ从质粒pcDNA3.1(+)/hCLCA1中切出hCLCA1基因片段，将其亚克隆入相同酶切的载体pIRES2EGFP，重组质粒命名为pIRES2EGFP/hCLCA1. 转染大肠杆菌JM109感受态细胞，铺板（含卡那霉素），挑克隆，酶切电泳鉴定. 测序鉴定由上海鼎安科技公司完成.
夜上海论坛 1.2.2细胞转染及筛选① 新霉素（G418）浓度的确定以细胞密度4×105 /孔将NCIH292细胞接种于24孔板中，采用含100 mL/L灭活小牛血清的DMEM进行培养，并分别加入梯度浓度G418（200， 300， 400， 500， 600， 700， 800 g/L）. 培养10~14 d，选择能全部杀死细胞所用G418的最低浓度. ② 转染与筛选参照Lipofect AMINE 2000TM试剂说明书，在Lipofectin介导下将pIRES2EFGP/hCLCA1转染NCIH292细胞. 72 h后，改用含G418培养液筛选3~4 wk. 获得的细胞命名为NCIH292/hCLCA1.
1.2.3转染细胞鉴定① 荧光显微镜下观察细胞荧光蛋白表达情况. ②分别收集转染细胞NCIH292/hCLCA1和亲本细胞NCIH292，经TRI REAGENT抽提细胞总RNA，按照RevertAidTM逆转录试剂盒产品说明操作步骤，合成cDNA第1链，紫外吸收法定量后，用PCR法扩增目的片段. 参照文献［3］合成hCLCA1及内参照GAPDH的上下游引物. hCLCA1 5′端引物： TGA TGC TAC TAA GGA TGA C，3′端引物： TTC CTC AGA GTT GGC TTC CT. GAPDH 5′端引物： ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC，3′端引物： TCC ACC ACC ACC CTG TTG CTG TA. hCLCA1循环参数： 94℃变性30 s， 63℃退火1 min，72℃延伸1 min； GAPDH循环参数： 94℃变性20 s， 59℃退火20 s， 72℃延伸20 s；均循环35次. 各PCR扩增产物行琼脂糖凝胶电泳鉴定.
1.2.4细胞分组根据NFA干预与否分成4组： ① NCIH292；② NCIH292+NFA，待细胞长至对数生长期，加入终浓度为100 mg/L的NFA干预24 h; ③ NCIH292/hCLCA1；④ NCIH292/hCLCA1+NFA，干预方案同②. 各组实验重复5次.
夜上海论坛 1.2.5MTT法检测细胞的增殖活性将各组细胞以5×104/孔种植于96孔培养板，待NFA干预24 h后，每孔加入MTT溶液200 μL，继续培养4 h. 去上清，每孔加入DMSO 200 μL. 轻度振荡混匀后，用酶联免疫吸附测定仪测定A490 nm.
1.2.6PAS特染法检测细胞黏液糖蛋白的表达取各组细胞爬片，高碘酸氧化液中浸泡10~20 min. 蒸馏水洗2次. Schiff液染色10 min. 流水清洗5 min. 用Harris明矾苏木精衬染核2~3 min. 5 mL/L盐酸乙醇分化30 s，自来水冲洗5 min返蓝. 系列乙醇脱水，二甲苯透明，封片.
夜上海论坛 1.2.7RTPCR法检测黏蛋白MUC5AC mRNA同1.2.3中RTPCR步骤，合成各组细胞cDNA第1链后，进行目的片段的扩增. 参照文献［6］合成MUC5AC的上下游引物，MUC5AC 5′端引物： TCC GGC CTC ATC TTC TCC，3′端引物： ACT TGG GCA CTG GTG CTG. 94℃变性30 s，60℃退火50 s， 72℃延伸50 s，循环35次. GAPDH为内参照. 利用ImageTool 3.0图像分析软件，测量各组MUC5AC条带与GAPDH条带的灰度值.
统计学处理： 实验数据以x±s表示，通过SPSS 10.0软件进行统计分析. 多组间比较采用析因设计资料的方差分析.
2结果
2.1重组质粒pIRES2EGFP/hCLCA1的鉴定将质粒pIRES2EGFP/hCLCA1用NheⅠ和XholⅠ双酶切后电泳，得到5300 bp和2900 bp 2个片段，分别与载体及目的基因的预期大小一致. 初步说明重组表达质粒的构建正确（Fig 1）. 测序结果显示，目的基因片段的序列与GenBank中No.AF039400的登录序列完全相同.
夜上海论坛 2.2细胞转染效果梯度浓度G418的干预结果表明，500 g/L为最适筛选浓度，连续筛选3 wk. 倒置显微镜下观察，所有存活细胞呈现单层贴壁生长的梭性或多边形，与亲本NCIH292细胞形态相似. 荧光显微镜下观察可见，NCIH292/hCLCA1细胞的整个胞体显现出淡绿色荧光，尤以胞核明显. RTPCR法检测hCLCA1 mRNA水平，电泳结果可见NCIH292/hCLCA1细胞组在预期523 bp处出现清晰条带，而亲本细胞组为阴性. 其中GAPDH cDNA大小为411 bp （Fig 2）. 标签蛋白翻译水平和目的蛋白转录水平的检测均表明，重组质粒pIRES2EGFP/hCLCA1转染及表达过程成功.
2.3细胞增殖活性与NCIH292细胞组相比，NCIH292/hCLCA1细胞组的A490 nm值显著升高（P
夜上海论坛 2.4细胞黏液糖蛋白的表达NCIH292/hCLCA1细胞的胞质普遍出现深紫红色颗粒；而其他3组的细胞胞质均呈很淡的紫红色，且着色程度相近（Fig 4）.
2.5黏蛋白MUC5AC mRNA水平由Fig 5电泳结果可见，各组均在预期679 bp处出现特异性条带. NCIH292/hCLCA1细胞组的灰度值（235±3）明显高于NCIH292细胞组（173±3）和NCIH292/hCLCA1细胞+NFA组（180±5）（均P
3讨论
黏液糖蛋白主要由杯状细胞产生，是气道粘液层的主要成份，并能使黏液具备弹性和粘附性的生理特性. 然而，杯状细胞异常增生或化生及由此产生的气道黏液高分泌，是哮喘的重要病理特征. 临床研究证实，黏液高分泌病史是肺功能第1秒用力呼气量（FEV1）下降加速的独立危险因素. 在哮喘病情加重过程中，这种过度分泌而导致的气道阻塞尤为突出，常成为重症哮喘的主要死因之一. 由于杯状细胞产生黏蛋白的机制尚未完全弄清，目前临床没有针对性药物. 近年来，IL9， IL4， IL13等Th2细胞因子等外界因素以及杯状细胞自身表皮生长因子受体（EGFR）、凋亡抑制蛋白Bcl2等对粘蛋白产生的促进作用，先后得到证实［7］. 尤其引人注目的是杯状细胞CLCA与黏蛋白分泌的关系. 2001年Nakanishi等［3］首先利用正义和反义RNA技术证明，小鼠气道杯状细胞钙激活Cl通道Ⅲ型（mCLCA3）高表达，是致敏哮喘小鼠粘液高分泌的关键环节. 而正常小鼠mCLCA3表达量极低. 次年Hoshino等［4］报道mCLCA3的异种同源蛋白hCLCA1在哮喘患者杯状细胞高表达，是正常人群的近3倍. Toda等［5］的结果还表明，杯状细胞hCLCA1 mRNA与IL9R两者的阳性率密切相关，提示hCLCA1与其他促分泌因素有着内在联系. 因此，进一步通过离体实验证实hCLCA1与杯状细胞黏蛋白产生的因果关系，将为通过阻断CLCA来控制气道黏液高分泌提供理论依据. 我们首先证实在NCIH292细胞未能检测到hCLCA1 mRNA. 利用基因工程技术，成功地将带有hCLCA1基因的真核表达载体导入NCIH292细胞. 从标签蛋白的表达、hCLCA1的转录两方面证实筛选出NCIH292/hCLCA1稳定转染的细胞. 在此基础上，MTT法结果显示NCIH292/hCLCA1细胞的增殖活性高于亲本细胞.
PAS特染及RTPCR法检测表明，NCIH292/hCLCA1细胞中黏蛋白MUC5AC的含量显著高于亲本细胞. 这与在体研究结果相一致［3］. 而CLCA通道阻断剂NFA有效减低了NCIH292/hCLCA1细胞的高增殖活性、黏蛋白高表达. 正反两方面均证实hCLCA1对粘蛋白合成具有促进作用. 这可能与CLCA对胞内高Ca2＋的维持有着正反馈效应有关［8］. 还需深入研究的是CLCA的胞内信号转导机制及与其他促进因素的关系.
参考文献
夜上海论坛 ［1］ Fahy JY. Goblet cell and mucin gene abnormalities in asthma ［J］. Chest， 2002; 122(6 Suppl): S320-326.
［2］ Zuhdi AM， Piazza FM， Selby DM， et al. Muc5/5ac mucin messenger RNA and protein expression is a marker of goblet cell metaplasia in murine airways ［J］. Am J Respir Cell Mol Biol， 2000; 22: 253-260.
夜上海论坛 ［3］ Nakanishi A， Morita S， Iwashita H， et al. Role of gob5 in mucus overproduction and airway hyperresponsiveness in asthma ［J］. Proc Natl Acad Sci USA， 2001; 98(9): 5175-5180.
［4］ Hoshino M， Morita S， Iwashita H， et al. Increased expression of the Human Ca2+activated Cl Channel 1 (CaCC1) gene in the asthmatic airway ［J］. Am J Respir Crit Care Med， 2002; 165(8): 1132-1136.
［5］ Toda M， Tulic MK， Levitt RC， et al. A calciumactivated chloride channel (HCLCA1) is strongly related to IL9 expression and mucus production in bronchial epithelium of patients with asthma ［J］. J Allergy Clin Immunol， 2002; 109(2): 246-250.
夜上海论坛 ［6］ Shao MX， Ueki IF， Nadel JA. Tumor necrosis factor alphaconverting enzyme mediates MUC5AC mucin expression in cultured human airway epithelial cells ［J］. Proc Natl Acad Sci U S A， 2003; 100(20): 11618-11623.
